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HiFiScript快速去基因組cDNA 一鏈合成試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):3089 更新時(shí)間:2020-05-20

HiFiScript快速去基因組cDNA 一鏈合成試劑盒

目錄號(hào):K2582

保存條件:-20℃。

規(guī)格說明

Cat. No.

K2582-25

K2582-100

Kit Size

25

100

gDNA Eraser

12.5 µl

50 µl

10×gDNA Eraser Buffer

30 µl

120ul

HiFiScript,200 U/μl

25ul

100ul

5×RT Buffer

120ul

500ul

Primer Mix

30ul

120ul

RNase-Free Water

1ml

2×1 ml

 

本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

操作步驟

    將模板RNA在冰上解凍;試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上。使用前將每種溶

液渦旋振蕩混勻,并經(jīng)短暫離心后使用。

一、去除基因組DNA反應(yīng)

1.根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,總體積為10 μl。為了保證反應(yīng)液配制的準(zhǔn)確性,先按反應(yīng)數(shù)+2的量配制預(yù)混體系,然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中,后加入RNA樣品。

                                   

                    

試劑

10 μl反應(yīng)體系

10×gDNA Eraser Buffer

1 µl

gDNA Eraser

0.5 µl

RNA Template

10 pg-1 μg

RNase-Free Water

up to 10 µl

                              

  注意:1)如果總RNA量大于1 µg,請(qǐng)按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin),該產(chǎn)品貨號(hào)為K0596。

2.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

3.42℃孵育2分鐘(室溫反應(yīng)時(shí),可以延長到30分鐘)。

4.反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

二、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

1.根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,反應(yīng)液配制請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行。為了保證反應(yīng)液配置的

準(zhǔn)確性,先按數(shù)+2的量配制成預(yù)混溶液,然后再分裝 10 μl到每個(gè)反應(yīng)管中,取配制的

預(yù)混液10 μl加入至已完成去基因組的步驟1反應(yīng)管中。

試劑

20μ反應(yīng)體系

步驟1反應(yīng)液

10ul

HiFiScript,200 U/μl

1ul

Primer Mix

1ul

5×RT Buffer

4ul

RNase-Free Water

4ul

 注意:1)  可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer,建議20 μl 反應(yīng)體系   

   Oligo-dT Primer 50pmol,或Gene Specific Primer 2 pmol。

 

產(chǎn)品簡介

  本產(chǎn)品是用于去除基因組DNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的試劑盒。該試劑盒在42℃,2 min即可

除去基因組DNA。同時(shí)由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制gDNA  Eraser的組分,經(jīng)過gDNA

Eraser處理后的樣品可以直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。本試劑盒配有新型高效反轉(zhuǎn)

錄酶HiFiScript,新穎突變位點(diǎn)大幅提升酶的轉(zhuǎn)錄活性,cDNA *一鏈合成的效率和產(chǎn)

量更高,可利用pg級(jí)的總RNA或mRNA合成cDNA*一鏈。如逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA用于下

游熒光定量檢測,可在42℃,15min完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本試劑盒適用于*一鏈 cDNA的

合成和后續(xù)的RT-PCR、RT-qPCR、以及全長cDNA文庫的構(gòu)建等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.快速去除基因組:含有去除基因組DNA的gDNA  Eraser,只需 2 min即可除去基因

組DNA。

2.快速逆轉(zhuǎn)錄:15分鐘即可獲得熒光定量PCR模板cDNA*一鏈合成。

3.靈敏度高:可利用pg級(jí)總RNA或mRNA模板合成cDNA*一鏈。

4.高效的逆轉(zhuǎn)錄效率:新穎突變位點(diǎn)大幅提升酶活性能,獲得更高產(chǎn)量的cDNA。

注意事項(xiàng)

1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染,建議操作人

員帶kouzhao和一次性手套并經(jīng)常更換手套,使用專門的儀器和耗材。

2.逆轉(zhuǎn)錄體系配制在冰上進(jìn)行操作,防止RNA發(fā)生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于

-20 ºC保存,并盡量避免反復(fù)凍融。

3.反應(yīng)體系可倍比放大,10 μl反應(yīng)體系可大使用1μg總RNA。

4.Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成,也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用

Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

5.若起始RNA的量小于50 ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購,貨號(hào)為K0596。

6.對(duì)于二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,建議在操作步驟之前,將模板RNA在65℃孵育5分

鐘立刻置于冰上,短暫離心后進(jìn)行下一步操作。

2.混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

3.cDNA合成反應(yīng)條件:

   1)若下游進(jìn)行熒光定量PCR檢測,42℃孵育15分鐘,85℃孵育5分鐘。

   2)若下游進(jìn)行普通PCR檢測,42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。

   注意:對(duì)于二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜或GC含量高的模板,可以提高逆轉(zhuǎn)錄溫度至50℃,增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄效率。

4.反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心后置于冰上,再進(jìn)行后續(xù)PCR或熒光定量PCR,如果需要長時(shí)

間保存,請(qǐng)置于-20℃。

注意:進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)時(shí),逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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